糖尿病心肌病变是糖尿病慢性并发症之一，独立于冠状动脉粥样硬化之外，以微血管为主要病理改变的心肌病变[1]。TGF-β1和HGF作为一对拮抗因子，在糖尿病心肌病变的形成中起重要作用。替米沙坦是一种新型的AT1拮抗剂，在2型糖尿病心肌中能降低TGF-β1的表达，从而对糖尿病心肌起保护作用，但能否升高HGF国内外少见报道。实验通过复制2型糖尿病动物模型，探讨替米沙坦对糖尿病大鼠血清和心肌中HGF表达的影响。

　　材料和方法

　　1 材料

　　1.1 实验动物  健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重（180±20）g，由实验动物研究中心提供。批号：SCXK（辽）2003-0007。饲养条件为温度18℃～25℃，相对湿度为40%～60%，3～4只为一笼，自由饮水。

　　1.2 试剂   链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ,Sigma公司）。替米沙坦（美卡素，德国勃林格殷格翰公司）。血清HGF试剂盒（双抗体夹心ELISA法，上海森雄科技实业有限公司）。兔抗大鼠多克隆HGF抗体（武汉博士德公司）。

　　1.3 实验仪器  EIO-RAD电泳槽及电泳仪     美国RAD公司

　　2  方法

　　2.1标本制备

　　雄性SD大鼠40只，单纯随机分为正常组（C组，n＝10），糖尿病模型组（D组， n＝15），替米沙坦干预组（T组， n＝15）。T组给予替米沙坦8.34mg/kg/d（相当于人80mg/d）， C组和D组用等剂量温水灌胃。给药12周末结束实验， 分别将各组大鼠用20％乌拉坦（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，心内采血测HGF;取左心室游离壁中部组织， western blot备测心肌HGF。

　　2.3血清HGF测定：双抗体夹心ELISA法测血清中HGF。应用芬兰生产的Wellscan MK-3型酶标仪测OD492值，根据不同浓度标准血清的OD492值作标准曲线，计算待测标本血清HGF浓度。

　　2.4心肌HGF测定：取黄豆粒大小左室心尖部心肌组织，应用BCA法，酶标分析仪测定各样品的吸光度，根据标准曲线计算出各样品总蛋白浓度。电泳，转膜，杂交，显色，利用Gene Genius生物图像凝胶分析仪测定目的蛋白条带亮度，以β-actin作为内参照。并以对照组样品条带亮度为100％，计算出各样品的相对值作为各蛋白质的相对表达量。本实验重复3次。

　　3 统计学处理

　　数据均采用SSPS 13.0统计软件包处理。定量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较用单因素方差分析（One-way ANOVA），两两比较用S-N-K检验，P<0.05认为有统计学差异。

　　结果

　　1各组大鼠生化指标比较比较

　　与C组相比，D组、T组FBG，FINS，IRI，TC和TG均升高；与D组相比，T组FINS，IRI和TG均降低，FBG和TC无统计学差异（见表1）。

　　组别TG（mmol/l）TC（mmol/l）FBG（mmol/l）FINS（μIU/ml）IRI

　　C组（n=9）0.73±0.051.93±0.06  4.66±0.5720.34±2.061.43±0.15

　　D组（n=7）1.65±0.07a4.90±0.10a   20.17±1.25a32.43±3.80a3.36±0.16a

　　T组（n=8）1.29±0.05a,b4.74±0.15a19.28±1.51a  25.69±3.17a,b3.08±0.11a,b

　　注：C组：正常对照组；D组：糖尿病模型组；T1组：替米沙坦剂量组1；T2组：替米沙坦剂量组2。与C组相比，aP＜0.01；与D组相比，bP＜0.01；

　　2各组空腹血清和心肌HGF的比较

　　与C组比较，D，T组血清和心肌HGF表达量升高；与D组比较，T组血清和心肌HGF显著升高（见2）。

　　表2各组血清HGF（pg/ml）和心肌中HGF（n=3）比较

　　组别HGF（pg/ml）组别HGF

　　C 组（n=9）35.3±3.17C 组（n=3）1.00±0.00

　　D 组（n=7）149.8±6.10 aD 组（n=3）2.73±0.07a

　　T组（n=8）194.6±6.01 a,bT组（n=3）3.59±0.09a,b

　　注：C组：正常对照组；D组：糖尿病模型组；T替米沙坦干预组。与C组相比，aP＜0.01；与D组相比，bP＜0.01。

　　讨论

　　HGF是一种多功能的多肽，通过抗凋亡和抗纤维化、保护心室重塑促进新血管形成参与糖尿病性心肌病的保护作用。目前有关HGF与糖尿病的关系尚存在争议。研究发现[1]高血糖环境里过氧化状态促进增多的低密度脂蛋白形成具有细胞毒性的氧化型低密度脂蛋白，后者诱导白细胞介素-1及肿瘤坏死因子的表达，这些炎症因子能进一步使HGFmRNA的表达升高。Nobuaki[2]等发现利用血管紧张素转化酶抑制剂和AngⅡ受体-1阻断剂治疗6周后，心脏、血管局部的HGF含量明显上升。给予HGF可部分抑制AngⅡ的作用，AngⅡ可使各脏器局部的HGF合成分泌减少，给与AngⅡ1型受体拮抗剂治疗后，HGF合成分泌增多，AngⅡ是HGF的强抑制剂。HGF在糖尿病中的浓度变化趋势可能是在病程早期，机体为了代偿心肌纤维化和心肌细胞凋亡，产生大量HGF，随着病程进展，HGF失代偿又有所降低。同时糖尿病组中由于AngⅡ表达增加，抑制HGF使心肌中表达减少。这与我们的试验中发现糖尿病组大鼠的血清及心肌中HGF的表达明显减少，使用替米沙坦治疗后，血清及心肌中HGF升高的结果基本一致。李虎英等[3]发现1型糖尿病大鼠心肌组织于12周TGF-β1表达明显增加，HGF的表达出现下降， TGF-β1和HGF的失衡可能参与了糖尿病心肌病的发生发展过程。替米沙坦可能通过抑制AngⅡ而解除对HGF的抑制，使心肌中HGF升高。至于HGF抑制纤维化的具体机制尚未十分明确，可能通过抑制TGF-β1[4]，CTGF这些下游因子拮抗AngⅡ的作用。另外由于AngⅡ引起的血管内皮损伤或心肌损害通过恢复后的HGF得到改善，对糖尿病心肌起保护作用。胡钢英等[5]研究发现用缬沙坦后，抑制了AngⅡ的作用，AngⅡ对HGF的负性调节作用减弱，HGFmRNA的表达水平增高，增高的HGF，又可通过抑制TGF-β1，即抑制胶原的合成途径，刺激基质金属蛋白酶-1的活性，即诱导胶原的分解途径，从而使胶原的合成量减少，对心肌起保护作用。关于替米沙坦对糖尿病心肌病变具体的保护机制还需进一步进行研究。

　　参考文献

　　1于晓华，张锦，周一军，等。 2型糖尿病合并大血管病变患者肝细胞生长因子水平观察中国综合临床2006,22（2）：140-142.

　　2 Nakano N, Moriguchi A, Morishita R, et a1. Role of angiotensin Ⅱ in the regulation of a novel vascular mod ulator, hepatocyte growth factor（HGF）， in experimental hypertensive rats. Hypertension, 1997, 30（6）： 1448-1454.

　　3 李虎英，李兴。肝细胞生长因子和转化生长因子在糖尿病性心肌病变中的作用。临床医药实践杂志，2006,15（11）：815-817.

　　4 Nakamura T <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Nakamura%20T%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus>, Matsumoto K <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Matsumoto%20K%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus>, Mizuno S <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Mizuno%20S%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus>, et a1. Hepatocyte growth factor prevents tissue fibrosis, remodeling and dysfunction in cardiomyopathic hamster hearts. Am J physiol Heart Circ Physiol, <javascript:AL_get（this,%20'jour',%20'Am%20J%20Physiol%20Heart%20Circ%20Physiol.'）；> 2005, 288（5）： H2131-9.

　　5胡钢英，王晋明，唐其柱，等。缬沙坦和螺内酯对高血压大鼠心肌生长因子和工型胶原mRNA表达的影响。高血压杂志，2003,11（4）：354-359.